產(chǎn)品介紹

西尼羅病毒（WN）IgM抗體ELISA檢測試劑盒

僅供科研使用

用途

西尼羅(WN)病毒IgM ELISA，利用了西尼羅重組抗原檢測人體血清或血漿中的西尼羅抗體。本實驗僅用于輔助診斷人感染了西尼羅病毒，不用于篩查血液或血液成分。僅供專業(yè)人員體外診斷使用。

概述

 感染了西尼羅病毒會導(dǎo)致包括腦炎等一系列癥狀的疾病，西尼羅病毒在世界廣泛傳播，已在50多個國家檢測出該病毒。本試驗經(jīng)CDC提供的試劑檢驗與驗證。本試驗使用了一種稱為WNRA的重組抗原，它可以作為西尼羅病毒感染的快速血清學(xué)指標(biāo)，WNRA蛋白是一種重組抗原，它是由含有西尼羅病毒兩個抗原的序列多肽構(gòu)成。

實驗的原理

檢測西尼羅病毒IgM ELISA 是基于兩步夾心法原理制造的。

提供的材料

1.        微孔板（96孔 12x8）：即用  每孔均包被結(jié)合西尼羅重組抗原的單抗。2－8℃下保存至保質(zhì)期。

注意：WNRA和NCA已包被于微孔板。

2.        IgM樣品稀釋液：1支 25ml 即用 2-8℃下保存至使用。

3.        IgM陰性質(zhì)控：1支 30ul  2-8℃下保存至使用。要長時間儲存，將其分裝于小瓶里，在-70℃下儲存。

4.        IgM陽性質(zhì)控：1支 30ul  2-8℃下保存至使用。要長時間儲存，將其分裝于小瓶里，在-70℃下儲存。

5.        洗滌液（10X）：1瓶 120ml  2－8℃下保存至使用。

6.        EnWash：1瓶 20ml 2－8℃下保存至使用。

7.        酶聯(lián)物：一瓶6ml 即用 2－8℃下保存至使用。

8.        TMB底物液： 1支 9ml 即用  2－8℃下保存至使用。

9.        終止液；1支6ml 即用  2－8℃下保存至使用。

試劑應(yīng)避免反復(fù)凍融。

操作步驟

在使用前將所有試劑和樣品平衡至室溫，并輕輕倒轉(zhuǎn)使其充分混勻。

實驗準(zhǔn)備：

將10X的濃縮洗滌液稀釋,將120ml的濃縮洗滌液加上1080ml的蒸餾水，搖勻，至無任何沉淀，稀釋好的洗滌液多可在室溫下放置兩個星期。

準(zhǔn)備實驗所需的板條，剩余的板條應(yīng)盡快放入袋子里重新密封，在2－8℃下儲存至保質(zhì)期。

操作步驟：

1.     標(biāo)記將要使用的板條，注意微孔板已經(jīng)按照統(tǒng)一排列，如下所述包被西尼羅抗原和質(zhì)控抗原。

解釋結(jié)果

1.  樣品的ISR值大于3.0視為陽性。

2.  陽性結(jié)果需重做證明。

3.  樣品的ISR值小于2.0視為陰性。

4.  樣品的ISR值小于3.0但是大于2.0，視為未確定，但是很有可能陽性，實驗需一式三份重做。

5.  ISR值大于2.0是因為WNRA和NCA的值都低造成的，應(yīng)該視為潛在假陽性。

樣品1低OD值的范例：
計算樣品的WNRA和NCA值：

平均WNRA=0.060/2=0.030

     NCA=0.026/2=0.013

     ISR=0.030/0.013=2.31

雖然樣品的ISR值高于2.0，但是本樣品需視為假陽性，因為其OD值低，而且遠(yuǎn)遠(yuǎn)偏離了相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)品，這通常在空白值高的情況下發(fā)生。

要進(jìn)一步證實樣品，所有陽性的結(jié)果都要用6，2層析稀釋滴定法重做，與相同滴定法的陰性質(zhì)控相比較，假如曲線是？？的，平的或者是波浪型的曲線，則表明為假陽性的結(jié)果。

實驗的局限性

1.  樣品的OD值高于抗原質(zhì)控（非WNRA）,導(dǎo)致ISR值小于3.0，則可能為假陰性，再釋稀樣品重新實驗，可能會獲得真正的ISR值。

2.  既然這不是一個直接檢測的方法，則需考慮假陽性和假陰性存在的可能性。

3.  所有有反應(yīng)的樣品，應(yīng)用確定性實驗來證實。

4.  本實驗提供的試劑，盡可能地檢測血清或血漿中的WNRA反應(yīng)性抗體水平。

5.  應(yīng)避免反復(fù)凍融樣品和試劑。

6.  不要使用溶血或脂血的樣品，它們會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

本譯文僅供參考，詳情請以原文為準(zhǔn)

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