雞傳染性法氏囊炎(IBDV)熒光PCR檢測試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

商品名稱：雞傳染性法氏囊炎病毒（IBDV）核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)

Name ：Diagnostic Kit for Infectious Bursal Disease Virus RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)

【包裝規(guī)格】48 份/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測的消化道組織、取排泄物、全血等標(biāo)本中雞傳染性法氏囊炎病毒 RNA，適用于雞傳染性法氏囊炎病毒感染的輔助診斷。其檢測結(jié)果僅供參考。

【檢驗原理】

本試劑盒用一對雞傳染性法氏囊炎病毒特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，用一步法熒光 RT-PCR 技術(shù)對雞傳染性法氏囊炎病毒 RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 5 次，

有效期 12 個月。

【標(biāo)本采集】

病死或撲殺禽，取消化道組織；待檢活禽，取排泄物，放于 1mL50%甘油生理鹽

水中，用注射器取血 5mL。

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標(biāo)

本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1.2RNA 提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒（離心柱提取

法），請按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性

對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑 IBDV 反應(yīng)液 酶液

用量 20μl 1μl

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl，分別加入相應(yīng)的反

應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul；熒光通道選擇：

檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請勿

選擇 ROX 參比熒光。

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲

線出現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15

范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value

值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線；

可疑：檢測通道 35.0<Ct 值≤37，建議重復(fù)檢測，如果檢測通道仍為 35.0<Ct

值≤37，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>37 或無 Ct 值。

7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無明顯擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32；

以上條件應(yīng)同時滿足，否則實驗視為無效。

8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)

陰陽性參考品符合率：5 份陽性參考品符合率為 100％；10 份陰性參考品符合率

為 100％。

低檢測限：5.0×102copies/ml。

精密度：批內(nèi)、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(shù)（CV）均小于等于 3%。

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